固定液和保存液配置方法

用固定液固定動植物整體或它的一部分組織和氣管等,能保存組織內細胞的形態、結構及其組成,盡量使它近于生活狀態。固定液一般有防腐和保存的作用,分為單純固定液和混合固定液。單純固定液中最重要的有乙醇、福爾馬林、醋酸、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀、升汞等,前兩種固定液是中學生物實驗室常用的。單純固定液的優點是簡便,缺點是有一定的局限性,不易達到理想的固定要求?;旌瞎潭ㄒ河袔追N不同的藥液按一定的比例混合而成,使各自的優缺點相互補充,成為較完美的固定液。這種固定液的制備雖比較麻煩,但是效果比較好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福爾馬林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。

常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福爾馬林、酒精、甘油以及由這些藥物按比例配制成的各種混合液。有時按特殊保存的需要,再保存液中增加某些藥品(如原生標本的保存液)。

1、福爾馬林

福爾馬林在固定組織標本時殺菌能力強,所以防腐性強,滲透力大,固定得快。永福爾馬林固定精細的解剖標本時,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的濃度是5~10%(根據材料的大小、性質和數量而定)。
保存液常用的濃度是5~10%。用福爾馬林作保存液,效果好且價格低廉。
在配制福爾馬林溶液(固定液或保存液)時,應將37~40%的甲醛作為整個溶質來配。例如配制5%福爾馬林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸餾水混合。實際上甲醛含量只有1.9~2%,這樣的配法已成為一般實驗室常用的慣例。
注意事項:
(1)福爾馬林業在長期貯存中會產生蟻酸,可適量的加入碳酸鈣(?)或碳酸鎂(?)等堿性物質進行中和。
(2)福爾馬林業作為保存液會慢慢揮發而致使濃度降低,并且福爾馬林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液變濁,影響觀察。所以,根據一定保存期的情況,可適當增加福爾馬林液的濃度或更換新液,以防標本變壞。其中如有白色沉淀物,加熱后可使它溶解。
(3)市售的福爾馬林液常帶有酸性,能腐蝕石灰質,因此,最好不用福爾馬林液浸制有石灰質外殼的動物。

2、酒精(乙醇)

酒精也是常用的固定液,它有強烈的殺菌作用,對組織材料的滲透力較大,固定的快。但是,它的脫水作用較強,在高濃度的酒精中容易使材料顯著硬化和收縮。一般用于固定浸制標本材料,分一級或二級固定,即70%或50%與70%的酒精。有些小型材料或精細的解剖材料,最好用二級或三級固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再進行保存。從經濟效果來考慮,一般酒精應跟福爾馬林液等固定液混合使用。
市售的工業用酒精濃度是95%左右,因此用時要重新配制。保存液的濃度通常是70%。
注意事項:
(1)在固定材料時要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必須先往體內注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料內部腐懷變質。用福爾馬林液固定也是如此。
(2)高濃度的酒精有脫水、脫脂作用。含有多量脂肪或擬脂標本(如腦、脊髓)等都不宜用較高濃度的酒精作保存液。
(3)為了防止酒精使標本硬化,保存一些精細的材料或解剖標本時,因加入少量甘油,因為甘油具有潤軟組織的作用。
(4)忌跟鉻酸、鋨酸和中鉻酸鉀等氧化劑配合。

3、醋酸

醋酸即乙酸,純醋酸在低于16.7攝氏度時會凝成冰狀固體,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透組織,因為它不能沉淀細胞質中的蛋白質,組織不會硬化。一般常跟酒精、福爾馬林、鉻酸等容易引起組織變硬和收縮的液體混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用濃度是0.3%~5%。

4、苦味酸

苦味酸是一種黃色結晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)??辔端嵋材艹恋硪磺械鞍踪|,穿透較慢,固定后,組織收縮明顯,但不使組織硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸餾水中加入苦味酸約1.5克,制成飽和水溶液。固體苦味酸易爆,長制成飽和水溶液保存。

5、升汞

升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以針狀結晶為最純。通常固定時用飽和水溶液,有時也用70%酒精作溶劑,不單獨用作固定劑。升汞的穿透力較弱,通常用于小型材料,對蛋白質有強烈的沉淀作用,硬化程度中等。
固定液用飽和溶液,濃度約為7%。

6、卡爾氏(Carl’s)液

配方
95%酒精?170毫升?蒸餾水?280毫升
福爾馬林?60毫升?冰醋酸?20毫升
冰醋酸要在臨用前加入。
這時極好的昆蟲保存液,常用來殺死和保存小型、身體柔軟的種類入螨、蜈蚣、馬陸等。在這溶液里加入少量甘油,能防止蟲體變脆。

7、卡諾氏(Carnoy’s)液

配方
純酒精?6份?冰醋酸?1份
氯仿?3份
這種固定液能固定細胞質和細胞核,尤其適宜于固定染色體,所以多用于細胞學的質片,還用來固定腺體、淋巴組織以及原生動物的胞殼等。這種固定液穿透得快,因此一般小塊組織固定20~40分鐘,大型材料不超過3~4小時。固定后用95%或純酒精洗滌,換液兩次,移到石蠟中或用80%酒精保存。

8、吉爾桑氏(Gilson)液

配方
60%酒精?50毫升?冰醋酸?2毫升
80%硝酸?7.5毫升?升汞?10克
蒸餾水?440毫升
這是常用的固定液,適用于肉質菌類,特別是柔軟膠質狀的材料如木耳等,也廣泛用于無脊椎動物和一般組織和蛙胚的固定。固定時間18~20小時,然后用50%酒精沖洗材料,除去升汞。如果用水沖洗,會使材料膨脹?;旌弦罕4?4小時后失效。

9、福爾馬林–醋酸–酒精溶液(FAA)液

配方
50%酒精?85毫升?福爾馬林?10毫升
冰醋酸?5毫升
這種固定液適用于固定一般植物莖、葉組織,昆蟲和甲殼類動物。液組織在這溶液里固定12小時,木質化組織要固定1周,材料也可在此液中長期保存。固定后的材料放在50%酒精中沖洗1~2次。

10、克來寧堡氏(Kleinenberg’s)液

配方
在20%硫酸水溶液內加入苦味酸,直到飽和。
這種固定液適用于雞胚的固定,也用于許多小型海洋生物的固定。

11、包因氏(Bouin’s)液

配方
苦味酸飽和水溶液?75毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?25毫升
這是常用的良好固定劑,滲透迅速,固定均勻,組織收縮少,染色后能顯示一般的微細結構。一般動物組織、無脊椎動物的卵和幼蟲以及一般組織學、胚胎學的材料,如植物組織的根尖和胚囊都可用它來固定。一般組織固定24~48小時,小塊組織固定4~16小時,動物材料能在這種固定液中長期保存。固定后,動物材料用70%酒精沖洗凈苦味酸,到無黃色為止(用酒精沖洗時,加幾滴氨水,可加快除去黃色);植物材料用20%酒精沖洗幾次。

12、紹丁氏(Schaudinn’s)液

配方
甲液?升汞飽和水溶液?66毫升
95%酒精?33毫升
乙液?冰醋酸?1毫升
甲、乙液要在臨用前混合。
這種固定液適用于固定有鞭毛的原生動物、植物的精子和游動孢子等。材料如制作涂布裝片,可在40攝氏度下固定10~20分鐘。

13、眼球固定液

配方
丙酮?40毫升?冰醋酸?1.5毫升
升汞?2克?甲醛?10毫升
蒸餾水?40毫升
這種固定液適用于眼球的固定,并可在固定液中長期保存。

14、納瓦興氏(Nawaschin’s)液

配方
甲液?鉻酸?1.5克?冰醋酸?10毫升
蒸餾水?90毫升
乙液?福爾馬林?40毫升?蒸餾水?60毫升
臨用前將等量甲、乙液混合。
高等植物有絲分裂材料適宜在這種固定液里固定或長期保存。

15、綠色標本保存液

配方一
硫酸銅?5克?水?95毫升
這種保存液適用于綠色植物和一切植物綠色部分的保存。植物放入硫酸銅液后,由綠變黃,再由黃變綠。這時取出材料,用清水漂洗干凈,浸在5%福爾馬林液內長期保存。
配方二
硫酸銅?0.2克?95%酒精?50毫升
福爾馬林?10毫升?冰醋酸?5毫升
水?35毫升
先把硫酸銅溶于水中,然后加入配方中的其他組分。綠色標本能長期的貯存在該液中。
配方三
醋酸銅?15~30克?50%醋酸?100毫升
在50%醋酸中逐漸加入醋酸銅,直到飽和。適用時取原液1份,加水4份,即成稀釋的硫酸銅溶液。
這種保存液適用于表面有蠟質、蛙質、質地較硬的綠色植物保色。加熱稀釋到醋酸銅溶液,放入植物,輕輕翻動,到植物由綠轉黃再轉綠色時取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福爾馬林液內保存。

16、紅色標本保存液

配方一
甲液?硼酸?3克?福爾馬林?4毫升
水?400毫升
乙液?亞硫酸?2毫升?硼酸?10克
水?488毫升
把紅色的果實浸在甲液里1~3天,等果實由紅色轉深棕色時取出,移到乙液里保存,同時在果實內注入少量乙液。
配方二
氯化鋅?2份?福爾馬林?1份
甘油?1份?水?40份
先把氯化鋅溶解在水里,然后加入配方中其他組分。溶液如果渾濁而有沉淀,應過濾后使用。紅色果實能在此液中保存。

17、黃色標本保存液

配方一
甲液?硫酸銅?5克?水?95毫升
乙液?6%亞硫酸?30毫升?甘油?30毫升
95%酒精?30毫升?水?900毫升
先把植物標本在甲液中浸1~2天,取出洗凈后,浸入乙液中保存,同時在果實內注入少量乙液。
配方二
6%亞硫酸?568毫升?80%酒精?568毫升
水?450毫升
植物材料能在這種保存液中長期保存。

18、紫色標本保存液

配方一
95%酒精?20毫升?福爾馬林?20毫升
水?60毫升
使用時,取1份原液加9份水稀釋,植物材料能在這溶液中保存。

配方二
食鹽飽和水溶液?30毫升?水?175毫升
福爾馬林?20毫升?甘油?少量
植物材料能在這溶液中保存。

19、白色標本保存液

配方一
甲液?5%硫酸銅溶液
乙液?1~4%亞硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。雜有綠色的白色植物材料先浸在5%硫酸銅溶液內1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。
配方二
氯化鋅?32克?95%酒精?125毫升
水?1000毫升
把氯化鋅溶于水中,再加入酒精。植物材料能在這溶液中保存。

20、綠色幼蟲保存液

甲液?福爾馬林?4毫升?醋酸銅?1克
硝酸鉀?1克?水?100毫升
乙液?甘油?20毫升?醋酸鉀?10克
福爾馬林?1毫升?水?100毫升
先把昆蟲幼蟲放在80攝氏度熱水中燙死,曬干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀釋一倍的乙液中保存。
配方二
甲液?95%酒精?90毫升?甘油?2.5毫升
福爾馬林?2.5毫升?冰醋酸?2.5毫升
氯化銅?3克
乙液?冰醋酸?5毫升?福爾馬林?4毫升
水?100毫升
將絕食1~2天的幼蟲,用注射器從肛門向體內注射甲液,12小時后轉入乙液內保存,約20天更換1次乙液。

21、黃色幼蟲保存液

甲液?苦味酸飽和液?10毫升?冰醋酸?5毫升
福爾馬林?2.5毫升
乙液?與綠色幼蟲保存液配方二乙液相同
用注射器從幼蟲肛門內注入甲液,12小時后轉入乙液內保存。

22、紅色幼蟲保存液

硼砂?2克?50%酒精?100毫升
昆蟲幼蟲能在這溶液中保存。

23、動物內臟原色保存液

甲液?福爾馬林?200毫升?硝酸鉀?15克
醋酸鉀?30克?水?1000毫升
乙液?甘油?200毫升?醋酸鉀?100克
麝香草酚?2.5克?水?1000毫升
先把材料放在甲液內固定,固定時間根據材料的大小而定,一般需1~5天。當材料失去自然色澤而呈暗褐色時,用手輕輕擠壓,直到沒有淡紅色血水流出時,取出材料,用清水沖洗,在浸在85%酒精中3~24小時(不能太久,否則易破壞色素),到血色恢復后,浸在乙液中保存。

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